1. 制備從M13噬菌體mGP1-2原種，加PEG溶液沉淀濃縮噬菌體。重懸噬菌體于M9培養基，滴定其滴度。 2. 將由“基本方案”步驟1所得的含T7 啟動子表達質粒轉化M13許可性大腸桿菌細胞，轉化物涂布于氨芐青霉素平皿上，37℃培養過夜。挑取獨立轉化菌落，接種于LB/氨芐青霉素培養基中，37℃溫育過夜。
3. 將過夜培養物以1：100比例稀釋于LB/氨芐青霉素培養基中，37℃緩緩振蕩培養至OD590≈0.5（避免劇烈振蕩）。
4. 從步驟1得到的M13噬菌體mGP1-2以每細胞感染約10個噬菌體的量，感染大腸桿菌，加100 mmol/l IPTG至終濃度為1 mmol/l，誘導T7 RNA聚合酶表達。37 ℃下溫育細胞2 h。
5. 通SDS-聚丙烯酰胺電泳分析誘導產生的蛋白。將相當于1.0 ml 培養液中的細胞重懸于0.1 ml 裂解緩沖液中，100℃加熱5 min 后，立即將各樣本以每份20 μl 的量加到SDS-聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳。可取10 μl 細胞制備適當的細胞提取物檢測誘導后的酶活性。
6. 收獲細胞并分析產生的誘導蛋白。 展開 | 