姊妹染色單體互換標本制備與分析實驗
姐妹染色單體是由一個著絲點連著的并行的兩條染色單體,是在細胞分裂的間期由同一條染色體經復制后形成的,在細胞分裂的間期、前期、中期成對存在,其大小、形態、結構及來源完全相同。實驗方法原理5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc簡稱BrdU)是胸腺嘧啶核苷的類似物。人體淋巴細胞在含有BrdU的培養液中進行DNA復制時,BrdU可專一替代胸腺嘧啶核苷,而摻入到新復制的DNA核苷酸鏈中。因此只要通過兩個復制周期,就可使姊妹染色單體中一條單體的DNA鏈中,有一股鏈是摻入BrdU的,而另一條單體的DNA雙鏈,兩股鏈全摻入BrdU。由于雙股都含有BrdU的DNA分子構形有變化,使這條染色單體對某些染色劑的親合力降低,用Giemsa染液染色時就可清楚看到雙股都含BrdU的DNA鏈所組成的單體著色淺,而另一條單體著色深。這樣就可利用這一技術檢查同一染色體的兩條姊妹染色單體互換(SCE)的情況。現已證明,許多致突變劑和致癌物質可......閱讀全文
姐妹染色單體交換實驗
實驗方法原理 用胰蛋白酶消化 BUdR 標記了的兩個細胞周期并停留在分裂中期的細胞,在低張緩沖液中孵育細胞,然后固定。用 Hoechst 33258 處理細胞后制備載有細胞的載玻片,光降解染色體。用姬姆薩進行染色體染色,在光學顯微鏡的油鏡下進行觀察。試劑、試劑盒D-PBSA PE ?? ? ? ?
體外培養細胞的染色體標本制備實驗
實驗材料細胞實驗步驟1. 體外培養的細胞,在倒置鏡下觀察到有較多的分裂細胞(傳代后24h,圓形發亮的細胞)時,加入秋水仙素溶液,終濃度為0.3μg/ml培養液;?2. 繼續培養3h;?3. 胰酶消化收集細胞至離心管;?4. 離心1000轉/min,離心10min,去上清;?5. Hanks液洗,離心
染色體CBG標本制備實驗——基本方案
實驗方法原理異染色質在整個分裂間期及分裂期都是濃縮的,因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近,或在染色體臂上呈現“團塊”,這些染色質主要由C顯帶技術呈現,故稱為C帶。CBG即C帶、Ba(OH)2、Giemsa的簡寫。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA,但在C帶區有很強抗性,仍保留大部分
病毒免疫熒光實驗_病毒染色標本的制備
實驗材料待檢測病毒試劑、試劑盒丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯儀器、耗材玻片實驗步驟1. 培養細胞小玻片標本的制備 根據所檢測病毒種類,選擇敏感細胞進行培養,如乙型肝炎病毒用乳地鼠腎細胞 (BHK21 細胞)培養,森林腦炎病毒用綠猴腎細胞 (Vero 細胞)培養,登革熱病毒用白紋伊蚊
體外培養細胞的染色體標本制備實驗
實驗材料?細胞實驗步驟?1. 體外培養的細胞,在倒置鏡下觀察到有較多的分裂細胞(傳代后24h,圓形發亮的細胞)時,加入秋水仙素溶液,終濃度為0.3μg/ml培養液;?2. 繼續培養3h;?3. 胰酶消化收集細胞至離心管;?4. 離心1000轉/min,離心10min,去上清;?5. Hanks液洗,
染色體GTG標本制備
一、原理????非顯帶染色體除可根據形態分辨部分染色體,其他多數染色體難以確認,而顯帶技術則可使染色體縱向長度上出現不同帶紋,以辨認全部染色體。GTG即G帶,Trypsin(胰酶),Giemsa的簡寫。Giemsa染料是噻嗪--曙紅染料,染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪--曙紅(2∶1)的沉淀物。著
染色體CBG標本制備
一、原理????異染色質在整個分裂間期及分裂期都是濃縮的,因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近,或在染色體臂上呈現“團塊”,這些染色質主要由C顯帶技術呈現,故稱為C帶。CBG即C帶、Ba(OH)2、Giemsa的簡寫。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA,但在C帶區有很強抗性,仍保留大
絨毛標本分裂中期染色體涂片制備實驗
實驗材料絨毛樣本試劑、試劑盒HBSS胰酶 EDTA HBSS 溶液膠原蛋白酶溶液完全培養基秋水仙胺枸櫞酸鈉甲醛 冰乙酸儀器、耗材無菌 Watchmaker 精細鑷冷試管搖床試管混合器Sorvall GLC-2B 離心設備HL-4轉子和6個 15ml 離心管塑料培養皿倒置顯微鏡或解剖顯微鏡熱氣增濕器空
絨毛標本分裂中期染色體涂片制備實驗
實驗材料 絨毛樣本試劑、試劑盒 HBSS胰酶 EDTA HBSS 溶液膠原蛋白酶溶液完全培養基秋水仙胺 枸櫞酸鈉甲醛 冰乙酸儀器、耗材 無菌 Watchmaker 精細鑷冷試管搖床試管混合器Sorvall GLC-2B 離心設備HL-4轉子和6個 15ml 離心管塑料培養皿倒置顯微鏡或解剖顯微鏡熱氣
染色體提前凝集標本制備
實驗方法原理 七十年代初,由于發現M期細胞內有某種促進染色體凝集因子,它無種屬特異性,所以在細胞融合和染色體技術的基礎上,建立了制備染色體提前凝集標本的方法。即讓M期細胞與間期(I期)細胞融合,從而誘導I期細胞染色質提前濃縮成染色體。形成的這種染色體稱提前凝集的染色體(PrematurelyCond
胸腹水染色體標本制備
某些腫瘤細胞可脫落入胸腹水中,并繼續生長、增值。因此,由胸腹水細胞可制備較好的染色體標本。胸腹水細胞染色體分析對惡性腫瘤具有輔助診斷的價值。如分裂相多,異倍性,有結構畸變,常支持陽性診斷。二、用品和試劑同外周血染色體制備。三、操作步驟1. 新鮮胸腹水20-40毫升,以1000rpm離心10分鐘。棄去
動物染色體標本的制備
秋水仙素阻斷細胞分裂法 實驗材料 蟾蜍 試劑、試劑盒 秋水仙素 生理鹽水 甲醇 冰醋
動物染色體標本的制備
秋水仙素阻斷細胞分裂法 實驗材料 蟾蜍 試劑、試劑盒 秋水仙素 生理鹽水 甲醇 冰醋
水稻根尖染色體標本制備
實驗概要? ? ? ? 水稻根尖染色體標本制備實驗步驟1.取材: 選取水稻種子,充分浸種后,將它們擺在鋪有濾紙的培養皿內,在約28℃條件下發芽培養,當胚根長至1~1.5cm時,剪下備用。2.預處理?? ? 壓片法:采用0.1%秋水仙素處理2h左右? ? 去壁低滲法可采用以下四種方法處理 ? ? ??
胸腹水染色體標本制備
一、原理????某些腫瘤細胞可脫落入胸腹水中,并繼續生長、增值。因此,由胸腹水細胞可制備較好的染色體標本。胸腹水細胞染色體分析對惡性腫瘤具有輔助診斷的價值。如分裂相多,異倍性,有結構畸變,常支持陽性診斷。二、用品和試劑????同外周血染色體制備。三、操作步驟????l.新鮮胸腹水20—40毫升,以1
水稻根尖染色體標本制備
1.取材: 選取水稻種子,充分浸種后,將它們擺在鋪有濾紙的培養皿內,在約28℃條件下發芽培養,當胚根長至1~1.5cm時,剪下備用。2.預處理?壓片法:采用0.1%秋水仙素處理2h左右去壁低滲法可采用以下四種方法處理處理方法 0.002mol/L8-羥基喹啉 α-溴萘飽和溶液 低溫(-4℃) 卡諾氏
動物染色體標本的制備
一、實驗目的1. 了解染色體標本制備的基本原理2. 掌握滴片法制備染色體標本的一般步驟二、實驗原理每一物種的細胞一般都具有一定數目、形狀和大小的染色體,在秋水仙素的作用下可使分裂細胞阻斷在中期,此時染色體形態最典型,然后通過低滲、固定、染色等步驟,便可在顯微鏡下呈現出其形態。三、實驗用品器具:顯微鏡
正常細胞常規核型的標本制備_腫瘤細胞染色體標本制備
實驗方法原理利用腫瘤細胞無限繁殖的特點,掌握其體外生長動態,取處于對數生長期的細胞便可獲得豐富的分裂相。腫瘤細胞染色體異常包括兩個方面:1. ?結構異常 ?即在腫瘤細胞常出現的染色體畸變,包括雙著絲點染色體、環狀染色體、斷裂的染色體、染色體裂隙及微小體等。2. ?數目異常 ?由于腫瘤細胞分裂失去應有
方案22.5-姐妹染色單體交換實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用胰蛋白酶消化 BUdR 標記了的兩個細胞周期并停留在分裂中期的細胞,在低張緩沖液中孵育細胞,然后固定。用 Hoechst 33258 處理細胞后制備載有細胞的載玻片,光降解染色體。用姬姆薩進行染色體染色,在光學顯微鏡的油鏡下
去壁低滲法制備植物染色體標本實驗
實驗材料黑麥(Secalecereale)、大麥(Hordeumvulgare)種子或洋蔥(Alliumcepa)鱗莖試劑、試劑盒對二氯苯飽和溶液甲醇冰醋酸70%酒精纖維素酶果膠酶Giemsa原液磷酸緩沖液(pH6.8~7.2)KCl儀器、耗材恒溫培養箱顯微鏡載玻片酒精燈實驗步驟1.取材:先將種子浸
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗——負染色技術
實驗方法原理病毒研究中用磷鎢酸染色后發現在黑色背景中病毒粒子如同一個亮晶晶的「空洞」。爾后用磷鎢酸對飛噬菌體染色也見到同樣的現象,即將這種現象稱為「負染色」。負染色是一種反襯染色,即高密度物質如重金屬磷鎢酸、醋酸鈾等在透射電鏡下形成黑色的背景反襯低密度的標本如病毒為白色透亮,從而清楚地顯示出被襯物的
洋蔥根尖有絲分裂染色體標本制備及觀察實驗
實驗方法原理 有絲分裂是細胞均等增殖的過程,是體細胞分裂的主要方式.在有絲分裂過程中,細胞內每條染色體都能復制一份,然后分配到子細胞中,因此兩個子細胞與母細胞所含的染色體在數目、形態和性質上均是相同的,在各種生長旺盛的植物組織中均存在著有絲分裂。分生組織→固定→解離→染色→壓片→觀察(間期、早期、中
去壁低滲法制備植物染色體標本實驗
?一、實驗目的: ? 1、掌屋植物染色體標本的去壁低滲方法 ? 2、了解中期染色體的形態結構 ? 二、實驗原理: ? 植物細胞有很堅實的細胞壁,染色體很難像動物染色體那樣平整地貼在載玻片上,可通過纖維素酶和果膠酶處理去掉細胞壁;用低滲溶液處理可以提高染色體的分散程度。陳瑞陽等(1979,19
染色單體斷裂
中文名稱染色單體斷裂英文名稱chromatid breakage定 義染色體兩個單體中僅一個發生斷裂的現象。應用學科遺傳學(一級學科),細胞遺傳學(二級學科)
正常細胞常規核型標本制備_人淋巴細胞染色體標本制備
實驗方法原理在淋巴母細胞分裂高峰時加入秋水仙素,破壞細胞紡錘體的形成,使細胞停止在分裂中期。然后收集細胞,低滲處理,使細胞脹大,染色體伸展。接著進行固定并除去中期分裂相中殘存的蛋白質,使染色體清晰且分散良好。再結合離心技術去掉紅細胞碎片,然后采用空氣干燥法制片獲得中期染色體標本。實驗材料HeLa細胞
羊水細胞染色體標本的制備
一、原理人的羊水細胞能長成單層并可連續進行傳代培養,但它們的一些特征與一般成纖維細胞不同。在羊水中存在著各種不同類型的胎兒細胞,依據其外形和生長特征可區分為以下三類:上皮細胞(E)、成纖維細胞(F)和羊水細胞(AF)。E細胞在胰酶消化的連續培養中不再生長,所以在培養過程中的生長期最短。AF細胞在再培
羊水細胞染色體標本的制備
一、原理????人的羊水細胞能長成單層并可連續進行傳代培養,但它們的一些特征與一般成纖維細胞不同。在羊水中存在著各種不同類型的胎兒細胞,依據其外形和生長特征可區分為以下三類:上皮細胞(E)、成纖維細胞(F)和羊水細胞(AF)。E細胞在胰酶消化的連續培養中不再生長,所以在培養過程中的生長期最短。AF細
羊水標本的制備、培養和分析實驗
實驗材料羊水試劑、試劑盒乙醇chang 培養基秋水仙胺低滲液甲醛 冰乙酸固定劑Permount 封固劑儀器、耗材用于細胞培養的20ml 注射器或試管15ml 離心管離心機蓋玻片巴氏吸管倒置顯微鏡精細鑷藍墊或紙巾玻片加熱器實驗步驟展
實驗動物組織標本的制備實驗
實驗材料 家兔豚鼠白鼠試劑、試劑盒 營養液儀器、耗材 注射器線浴槽實驗步驟 通常選用家兔、豚鼠、大白鼠或小白鼠等動物,禁食24 小時。擊頭致昏,以避免麻醉或失血對胃腸道機能的影響。立即打開腹腔,取出所需的胃、腸、膽囊等。去除附著的系膜或脂肪等組織。迅速放入充氧(或95%O2+5%CO2
姐妹染色單體分化染色方法
姐妹染色單體差別染色可使中期染色體顯示深淺不同的兩條單體,能借以觀察姐妹染色單體互換(SCE)現象。SCE是兩條染色單體在DNA合成中核苷酸序列發生互換而表現出來一種現象。即是細胞分裂是DNA同源重組的結果。SCE既是一種無害的變化(有生理波動),也可受射線、致突和致癌物三因素等作用而升高。SCE一