在CCK-8試劑盒中,最主要的化學藥品是WST-8,化學名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。
它的核心基團和MTT是一樣的,是MTT的升級版本。在電子耦合試劑(也就是細胞是活的,有呼吸,有能量代謝)存在的情況下,可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產物(Formazan)。活細胞越多,產生的Formazan就越多,顏色也會越深。
所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數量成正比。為什么是粗略的呢,因為這里沒有考慮到細胞代謝水平的高低,有些細胞在藥物處理后,可能活細胞數不變,但是代謝率低了以后,細胞呼吸減弱,NAD+產生減少,測出的Formazan也會減少。