LaVision雙光子顯微鏡多焦點掃描與光激活蛋白在...（三）
Fig. 5. 煙草BY-2原生質體中At2g38360-DsRed的定位和平行雙光子熒光顯微鏡對pa-GFP的3D監測（64 foci, 920 nm, 240 mW)。 (a) 雙光子熒光下降的量化分析，給出了一個123s的擴散時間常數。Figs. 3 and 4中的數據源于兩個不同的實驗，解釋了熒光值的絕對差異（不同的表達水平）和統計分析。 (b) At2g38360-DsRed作為轉染標記在核中pa-GFP激活前的熒光 (c) At2g38360-DsRed和pa-GFP數據采集后400 s的3D熒光圖像，清楚顯示了熒光團從細胞核向細胞質的擴散。Fig. 6.在核內光激活前后,煙草BY-2原生質體內活躍轉運的pa-GFP-LCL1的3D動態監測和量化分析。(a) 在pa-GFP-LCL1雙光子激發后核內的單光子熒光表明雙光子激活熒光增強 (b) pa-GFP被雙光子激活后雙指數曲線擬合（紅......閱讀全文
LaVision雙光子顯微鏡多焦點掃描與光激活蛋白在...（三）
Fig. 5. 煙草BY-2原生質體中At2g38360-DsRed的定位和平行雙光子熒光顯微鏡對pa-GFP的3D監測（64 foci, 920 nm, 240 mW)。 (a) 雙光子熒光下降的量化分析，給出了一個123s的擴散時間常數。Figs. 3 and 4中的數據源于兩個不同
LaVision雙光子顯微鏡多焦點掃描與光激活蛋白在...（一）
LaVision雙光子顯微鏡-多焦點掃描與光激活蛋白在核轉運研究中的應用Multifocal two-photon laser scanning microscopy combined with photo-activatable GFP for in vivo monitoring of intr
LaVision雙光子顯微鏡多焦點掃描與光激活蛋白在...（二）
3. 結果Fig. 2.含有核輸入輸出信號的擬南芥轉錄因子LCL1 (分別為NLS, NES). 由質粒編碼GFP融合蛋白轉染的煙草BY-2原生質體。通過單光子共聚焦激光掃描顯微鏡分析的GFP融合蛋白穩定態定位。(a) GFP-LCL1 揭示的核與細胞質間的分區?(b) 使用核輸出抑制劑leptom
LaVision雙光子顯微鏡多線掃描雙光子成像（三）
2.2.多線TPLSM中通過成像檢測釋放光??? 在單光束TPLSM中，光電倍增管PMT或者雪崩二極管APD可以很方便地用于釋放光檢測，由于雙光子激發的原理，激發只發生在激光焦點處。因此，用于屏蔽離焦光線的共焦小孔變得不必要，并且可以使用NDD檢測。這意味著激發光不會被送回掃描鏡，而是直接進入位于靠
LaVision雙光子顯微鏡多線掃描雙光子成像（一）
Journal of Neuroscience Methods 151 (2006) 276–286Application of multiline two-photon microscopy to functional in vivo imagingRafael Kurtz a,?, Matthi
LaVision雙光子顯微鏡多線掃描雙光子成像（二）
2. 方法與結果??? 為了從激光掃描顯微鏡的功能性成像中得出重要結論，一個高的時間分辨率是很重要的。在低光情況下，這通常通過進行單線掃描來獲取。這被以一個垂直系統（VS）神經元的突觸前分支的激光共聚焦(Leica SP2)鈣離子成像示例 (see Fig. 1, Table 1). 這類神
LaVision雙光子顯微鏡多線掃描雙光子成像（四）
2.3. 多線TPLSM中的獲取模式??? 我們以兩種獲取模式操作多線TPLSM：第一種，整個研究使用所謂“幀掃描”模式，以64束激光在X、Y方向掃描樣品。因此焦平面上激發了均一性照明，假定光束陣列的橫向步長尺寸沒有過于粗糙（通常使用≤400 nm的步長尺寸）。在Fig. 3A，展示了以“幀
LaVision雙光子顯微鏡腫瘤生長與入侵動態成像（三）
Fig 4. HT-1080雙色細胞的原位入侵模型。a 注射后6天入侵類型的分類。缺少入侵（上，左）并且散布單個細胞（上，右；白色箭頭），散射的或者緊密地絲狀整體入侵（下圖）。標尺250um。 b 45個連續的非依賴性腫瘤的按中所分入侵模式的頻率。11天時，沿著紋狀肌肉纖維集體入侵絲的定位。
可見光雙光子激發及多焦點激光掃描的結合（一）
對活體生物樣品的三維觀測是了解細胞功能的重要方法之一。目前已有的三維熒光成像技術包括光片顯微成像技術、晶格光照明技術以及激光掃描顯微成像技術(如共聚焦顯微鏡及雙光子顯微鏡)等。其中激光掃描顯微鏡利用旋轉盤可以進行多焦點的激光掃描,提高時間分辨率,而且有利于減少活細胞成像中的光損傷。本篇文獻主要實現了
可見光雙光子激發及多焦點激光掃描的結合（二）
在此基礎上,實驗對海拉細胞中的高爾基體(mTFP1)和纖顫蛋白(EGFP)進行了在體成像,見圖3(j)-(n),青色為mTFP1,綠色為EGFP,實驗中兩種熒光蛋白同時成像,最終采用光譜分離法將不同蛋白的熒光信號分離出來。圖4 海拉細胞在體延時三維觀察高爾基體的成像結果后續還進行了海拉細胞的活體高爾
LaVision雙光子顯微鏡腫瘤生長與入侵動態成像（二）
Fig 2. 腫瘤生長階段。 a 由落射熒光顯微鏡監測的移植瘤生長和入侵的時間進程。新生血管的插入，不存在（3天）和存在（7天）。標尺1mm。b 通過以day 1的體積進行歸一化的腫瘤體積。mean+-SD（n=9）。c HT-1080移植腫瘤在6天的時候的腫瘤形態，血管化，分生和凋亡。
LaVision雙光子顯微鏡腫瘤生長與入侵動態成像（一）
Dynamic imaging of cancer growth and invasion: a modiWedskin-fold chamber modelStephanie Alexander · Gudrun E. Koehl ·Markus Hirschberg · Edward K. Ge
LaVision雙光子顯微鏡無損傷無標記THG成像（三）
Fig. 4.THG成像深度與自動化細胞檢測 (A–C) 小鼠額前葉皮質的THG圖像，成像深度分別為100, 200, and 300 μm 。每幅圖像都是3個以2微米深度間隔獨立圖像的最大密度投影(D) 110 μm深度處神經元細胞的自動檢測THG圖像。細胞檢測的運算法則定義為以紅色顯示的
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（三）
Figure 2 NIR和IR雙光子激發和釋放光譜。通過在同一焦平面對不同波長的Ti：Sa激光和OPO激光獲取多幅圖像并對掃描間的能量強度和漂白進行校正后的激發光譜。為獲取紅色和內在熒光團以及SHG的釋放光譜，信號通過物鏡，光譜儀和CCD相機檢測。 (a) 自然狀態下，SDS-PAGE前后的
多光子顯微鏡中的焦點深度擴展方法（二）
為了解決使用單個環擴展焦深光通量不夠的問題， BINGYING CHEN等人利用超短脈沖相干長度短的特性，采用多環結構的分束掩模，超快激光脈沖經過時會被分束掩模分成不同的環形子束，每個子束都有時間延遲，也就是每個子束在不同的時間點在物鏡的焦平面上形成貝塞爾焦點。如果每個環引入的時間延遲大大超過了激光
多光子顯微鏡中的焦點深度擴展方法（一）
雙光子激光掃描顯微鏡結合鈣指示劑是活體神經元信號探測的金標準。神經網絡中的神經元分布在三維空間中，監測它們的活動動態需要一種能夠快速提高體積成像速率的方式。但是，使用光柵掃描多光子顯微鏡對大量圖像進行成像，如果采用高數值孔徑（NA）的物鏡來獲得較高的橫向分辨率時，會導致較小的聚焦深度，為了獲得小聚焦
Lavision雙光子顯微鏡毛囊再生過程活體成像（二）
Figure 2 |生長過程中處于形態重組的干細胞progeny隔層. a, 毛囊生長中的向下伸展。生長狀態的活毛囊三個連續時間點（3小時間隔）的光學切片，展示了progeny組分向下的伸展（左三） 。核間距增加，干細胞和progen隔層(大約生長初期 II to IIIa)中的總細胞數被定
Lavision雙光子顯微鏡毛囊再生過程活體成像（一）
Live imaging of stem cell and progeny behaviour in physiological hair-follicle regenerationPanteleimon Rompolas1, Elizabeth R. Deschene1*, Giovanni
LaVision雙光子顯微鏡無損傷無標記THG成像（二）
主要結果Fig. 1.無標記活體大腦的三次諧波顯微成像(A)腦組織THG成像的epidetection幾何學圖示。插圖：THG原理。注意基質中沒有光學激發發生。(B) 樹突處的聚焦激光束。通過將激光聚焦體積設定到樹突直徑的幾倍大小，可以獲得部分相匹配，顯著的THG信號將會產生。(C)細胞
LaVision雙光子顯微鏡無損傷無標記THG成像（一）
Label-free live brain imaging and targeted patching with third-harmonic generation microscopyStefan Wittea,b,1, Adrian Negreana,b,c, Johannes C. Lodde
多光子顯微鏡成像技術：雙光子顯微鏡角膜成像
角膜提供了眼睛的大部分折射能力,由5層組成(圖1),從外到內依次是上皮層,鮑曼層、基質、角膜后彈力層(間質膜)、內皮層。 wx_article_20200815180121_819doe.jpg 圖1 角膜的組織學結構 上皮層負責阻擋異物落入角膜,厚約50μm,由三
多光子顯微鏡成像技術：雙光子顯微鏡角膜成像
角膜提供了眼睛的大部分折射能力,由5層組成(圖1),從外到內依次是上皮層,鮑曼層、基質、角膜后彈力層(間質膜)、內皮層。圖1 角膜的組織學結構上皮層負責阻擋異物落入角膜,厚約50μm,由三種細胞構成,從外到內依次是表層細胞、翼細胞和基底細胞。只有基底細胞可進行有絲分裂和分化,基底細胞的補充是由從角膜
LaVision雙光子顯微鏡呼吸道網絡中的神經元活動
Glycinergic interneurons are functionally integrated into the inspiratory network of mouse medullary slicesStefan M. Winter & Jens Fresemann & Christi
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（四）
Figure 4．IR-MPM的光漂白，光毒性和組織穿透性. (a)以75mW能量的760, 880, and 1100 nm 激發波長連續掃描的釋放光的下降時測量的DsRed2光漂白。樣品被進行250次連續掃描，釋放光強度以整個掃描區域的平均像素強度量化，并對首幅圖像強度歸一化。虛線表明了
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（二）
系統性能和Ti:Sa與OPO激光的同時使用??? 為了同時獲取樣品Ti：Sa和OPO的激發，一個分光器將Ti：Sa激光分解為泵浦OPO光束和直接成像光束(Figure 1a). 分光比例取決于足夠激發所需的光亮，先后依賴于樣品特征（光密度，連續性和熒光團吸收截面）和想要的成像深度。在實際應用
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（五）
結論??? 這些結果表明紅外雙光子和二次諧波產生顯微成像對于無毒害的時間分辨的細胞行為調查的深層組織成像尤其有利。作為與其它脈沖飛秒激光系統相比的優勢，如Ch:forsterite (1230 nm) 和 Fianium fiber (1064 nm) 激光器，OPO產生的波長是可調諧的
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（一）
紅外雙（多）光子顯微鏡：亞細胞水平的深層組織成像Volker Andresen1,2, Stephanie Alexander1, Wolfgang-Moritz Heupel1, Markus Hirschberg1, Robert M Hoffman3 and Peter Friedl1,4Cu
Lavision雙光子共聚焦顯微鏡應用：毛囊再生過程活體成像
組織的發生與再生依賴于細胞-細胞間相互作用和指向干細胞的信號以及它們的直接增殖。但是，引導組織適當再生的細胞行為還沒有被很好的理解。運用一種新的，非侵入的雙光子成像技術，我們研究了活鼠隨時間推移的生理性毛囊再生。通過這種方法，我們監測了真皮層干細胞和它們的后代在生理性毛囊再生過程中的行為，并指出了間
雙光子顯微鏡的雙光子顯微鏡的優勢
雙光子熒光顯微鏡有很多優點：1）長波長的光比短波長的光受散射影響較小容易穿透標本；2）焦平面外的熒光分子不被激發使較多的激發光可以到達焦平面，使激發光可以穿透更深的標本；3）長波長的近紅外光比短波長的光對細胞毒性小；4）使用雙光子顯微鏡觀察標本的時候，只有在焦平面上才有光漂白和光毒性。所以，雙光子顯
多光子共聚焦掃描顯微鏡的原理以及應用
多光子共聚焦顯微鏡是光學顯微鏡的重大改進，主要表現為可以觀察活細胞、固定細胞和組織的深層結構，并且可以得到清晰銳利的多層Z平面結構，即光學切片，并以此可以構建標本的三維實體結構。共聚焦顯微鏡采用激光光源，經過擴充后充滿整個物鏡后焦平面，然后經過物鏡的透鏡系統，在標本的焦平面上會聚成非常小的點。根據物