31項與免疫學有關的分子生物學實驗技術（一）
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導至了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。一、GST pull-down實驗GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗證酵母雙雜交系統的體外試驗技術，近年來越來越受到廣大學者的青睞。GST pull-down實驗是將靶蛋白-GST融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上，作為與目的蛋白親和的支撐物，充當一種“誘餌蛋白”；目的蛋白溶液過柱，可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”（目的蛋白），洗脫結合物后通過SDS-PAGE電泳分析，從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應的目的蛋白；“誘餌蛋白”和“捕獲蛋白”均可通過細胞裂解物、純化的蛋白、表達系統以及體外轉錄翻譯系統等方法獲得。二、足跡法（Footprinting）足跡法全稱為DNA footprinting，又......閱讀全文
31項與免疫學有關的分子生物學實驗技術（一）
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導至了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。一、GST pull-down實驗GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗證酵母雙雜交
31項與免疫學有關的分子生物學實驗技術（二）
十二、大腸桿菌感受態細胞（E.coli DH5α）制備E.coli DH5α制備主要操作步驟：1）挑取受體菌（DH5或DH10B）的單菌落于LB培養基中37℃搖床培養過夜（約16小時）；2）取1ml過夜培養物轉接于100ml LB培養基中，在37℃搖床上劇烈振蕩培養約2.5-3小時（250-30
盤點：31項與免疫學有關的分子生物學實驗技術
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
分子生物學實驗診斷技術（一）
一、核酸雜交技術????? ? 檢驗方法建立的基本要素是特異性和靈敏度，在復雜的物體中，使無法感覺的特定物質進入人類的觀察范圍。核酸雜交檢測技術就是利用核酸堿基嚴格配對的特異性，核酸標記物的靈敏度而建立的檢測核酸結構與功能的方法。該法建立以來已有二十年，目前研究實驗室用得多，臨床實驗室用得較少，除成
分子生物學常用實驗技術（一）
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定第二章DNA 酶切及凝膠電泳第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化第四章RNA 的提取和cDNA 合成第五章重組質粒的連接、轉化及篩選第六章基因組DNA 的提取第七章RFLP 和RAPD 技術第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆第九章分子雜交技術第十章測
免疫學技術專題：組織病理實驗（一）
標簽： 組織病理組織學技術包括、組織學制片技術、胚胎學制片技術、組織化學技術、熒光組化及免疫組化技術、組織培養技術、各種特殊顯微技術、電鏡組織學技術。組織學技術不但應用于組織學本學科，并且廣泛應用于其他多學科，如生物學、解剖學、病理學、腫瘤學、法醫學、臨床診斷學等。實驗方法石蠟切片法冰凍切片實驗方法
分子生物學實驗室的常規儀器設備及有關操作（一）
【實驗目的】 ?（1）了解實驗的常規儀器、設備、耗材。 ?（2）掌握本實驗所用儀器的功能和使用方法。 ?【實驗內容】 ?一、驗室的常規儀器、設備 ?(一) 溫度控制系統： ?1. 冰箱: 根據藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱，最常使用的有：4℃、
一些分子生物學實驗小技術匯編
1．保存菌種保存菌種或長時間放置的培養板應先劃板活化菌種，挑取分隔良好的單 克隆接種于2-10 ml ＬＢ中（如菌種含質粒則應加抗生素）３７攝氏度快搖 ８小時，按0.1%-0.5% 比例轉種，培養基的量不應超過錐瓶的0.25容量，以 保證足夠的通氣。用O.D.600 測菌密度時，讀數值在0.1-0.
一些分子生物學實驗小技術2
5．有關融合蛋白表達載體的克隆 在構建融含蛋白表達載體時除了要注意插入片段的方向、讀碼框架與載體保持一致外，注意以下問題可能會減少一些不必要的麻煩，當外源片的插入載體起始密碼的后面，另一個基因的前面時，注意檢查插入后基因的兩端是否引入了新的終止密碼，特別是用到Klenow mung bean
一些分子生物學實驗小技術1
1．保存菌種保存菌種或長時間放置的培養板應先劃板活化菌種，挑取分隔良好的單 克隆接種于2-10 ml ＬＢ中（如菌種含質粒則應加抗生素）３７攝氏度快搖 ８小時，按0.1%-0.5% 比例轉種，培養基的量不應超過錐瓶的0.25容量，以 保證足夠的通氣。用O.D.600 測菌密度時，讀數值在0.
分子生物學實驗診斷技術
一、酸雜交技術檢驗方法建立的基本要素是特異性和靈敏度，在復雜的物體中，使無法感覺的特定物質進入人類的觀察范圍。核酸雜交檢測技術就是利用核酸堿基嚴格配對的特異性，核酸標記物的靈敏度而建立的檢測核酸結構與功能的方法。該法建立以來已有二十年，目前研究實驗室用得多，臨床實驗室用得較少，除成本高外，關鍵是操作
分子生物學實驗小技術
當找到可能的重組質粒且條帶清晰時可直接切下含DNA 的凝膠條帶，用膠回收DNA 的方法回收質粒并進行酶切鑒定，如果DNA 量太少則需重提質粒。 用QIAprep Miniprep Spin 小量提質粒注意以下事項可提高得率A．用含抗生素的培養基培養細菌會有較高的得率。B．收菌時用tips吸干凈殘余的
分子生物學實驗診斷技術
一、酸雜交技術檢驗方法建立的基本要素是特異性和靈敏度，在復雜的物體中，使無法感覺的特定物質進入人類的觀察范圍。核酸雜交檢測技術就是利用核酸堿基嚴格配對的特異性，核酸標記物的靈敏度而建立的檢測核酸結構與功能的方法。該法建立以來已有二十年，目前研究實驗室用得多，臨床實驗室用得較少，除成本高外，關鍵是操作
生物化學與分子生物學最常用的實驗技術
分子細胞生物學研究所用的實驗技術有哪些分子診斷學的研究范疇包括：利用遺傳學、病理學、免疫學、生物化學、基因組學、蛋白質組學和分子生物學的理論和方法探討疾病發生和發展的分子機制。為整個疾病過程尋求特異的分子診斷指標，以及利用分子生物學技術為這些分子診斷指標建立臨床實用的檢測方法。細胞培養技術指的是細胞
免疫學實驗免疫濁度技術介紹
免疫濁度技術介紹： 免疫濁度技術早期主要用于血清、尿和腦脊液中蛋白質含量的測定。免疫濁度技術是利用可溶性抗原、抗體在液相中特異結合，形成一定大小的抗原抗體復合物，使反應液出現濁度。當反應液中保持抗體過剩時，形成的復合物隨抗原量增加而增加，反應液的濁度亦隨之增加，與一系列的標準品對照，即可計算出
常用的分子生物學基本技術（一）
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
分子生物學實驗診斷技術（二）
（三）Northern blot用于RNA分析，電泳條件與轉膜方法與Southern blot不同外，RNA不必變性與中和，電泳時加電醛防止RNA發夾結構形成。其它步驟相同。為了防止RNase水解需分析的mRNA，盡可能將器皿在160-180℃干熱滅菌8小時以上，也可加0.1％焦碳酸二乙酯（DEPC
分子生物學常用實驗技術（十）
第二節RFLP 技術一、材料 基因組DNA(大于50kb,分別來自不同的材料)。二、設備 電泳儀及電泳槽， 照相用塑料盆5 只，玻璃或塑料板(比膠塊略大) 4 塊，吸水紙若干，尼龍膜(依膠大小而定)，濾紙，eppendorf 管(0.5ml)若干。三、試劑：1、限制性內切酶(BamHⅠ, Ec
分子生物學常用實驗技術（五）
第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第一節概述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA 的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA 和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA 文庫,構建的cDNA 文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA 和相
分子生物學常用實驗技術（十三）
2. 從RNA 合成單鏈cDNA 探針cDNA 單鏈探針主要用來分離cDNA 文庫中相應的基因。用RNA為模板合成cDNA 探針所用的引物有兩種: (1)用寡聚dT 為引物合成cDNA 探針。本方法只能用于帶Poly(A)的mRNA,并且產生的探針極大多數偏向于mRNA 3'末端序列
分子生物學常用實驗技術（十八）
五、操作步驟：（一）、模板制備1、M13 單鏈模板制備：在轉化入合適的大腸桿菌宿主菌且在含有指示劑如X-gal/IPTG 的培養基上鋪板之后, 含有M13 重組子的細胞將表現出無色的"噬菌斑"，事實上受感染的細胞并非被噬菌體溶菌或殺死，出現噬菌斑是因為被感染的細菌在生長速度上比其周圍未感染的
分子生物學實驗小技術（二）
1 、 各供應商送貨時往往會提供冰袋，在室溫下將化凍的大冰袋平整的一面整齊地插入1.5ml 或0.5ml 、0.2ml 的廢棄離心管；或將幾個化凍后的小冰袋填料塞入一個小泡沫盒中壓實，再插入各種大小的試管，放在-20 攝氏度下凍24小時后取出，拔出插入的廢管（可加點熱水以助拔管）即可做成一個
分子生物學常用實驗技術（十七）
第二節T7 DN A 聚合酶測序技術一、概述 T7 DNA 聚合酶最初具有5'→3'聚合酶活性以及單鏈和雙鏈3'→5'外切酶活性。當T7 DNA 聚合酶用適當方法處理后，可使3'→5'外切酶活力明顯下降。改造后的T7 DNA 聚合酶又稱T7
分子生物學常用實驗技術（二）
第三節操作步驟 一、細菌的培養和收集 將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12 小時至對數生長后期。 二、質粒D
分子生物學常用實驗技術（七）
（四） 電泳分析 通常合成的cDNA 第一鏈和第二鏈長度為350-6000 堿基,需進行1.4%堿性瓊脂糖電泳。將第一鏈和第二鏈摻入測定管中的反應液先用酚抽提,乙醇沉淀，方法見本章（二）第二鏈合成中的9-12 步，一般第一鏈和第二鏈上樣量相同。1. 標準分子量DNA 參照物的同位素標記(1) 通常
分子生物學常用實驗技術（九）
第三節從動物組織提取基因組DNA一、材料 哺乳動物新鮮組織。二、設備 移液管、高速冷凍離心機、臺式離心機、水浴鍋。三、試劑1、分離緩沖液：10mmol/L Tris?Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。2、其它試劑：10% SDS，蛋白酶K (20mg/
分子生物學常用實驗技術（十五）
第十章測序技術 在分子生物學研究中，DNA 的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger 等（1977）發明的雙脫氧鏈末端終止法和Maxam 和Gilbert（1977）發明的化學降解法。這二種方法在原理上差異很大，但都是根據核苷酸在某一固定的點開始，隨
分子生物學常用實驗技術（十六）
（三）電泳：1、預電泳（1）當凝膠聚合完全后，撥出鯊魚齒梳，將該梳子反過來，把有齒的一頭插入凝膠中，形成加樣孔。（2）立即將膠板固定在測序凝膠槽中，一般測序凝膠槽的上下槽是分開的，因而只有在固定好凝膠板后，方能加入TBE 緩沖液。（3）稀釋10×TBE 緩沖液至1×TBE，將該緩沖液加入上下二個電泳
分子生物學常用實驗技術（六）
一、材料 提純TMV 病毒液（10mg/ml）。二、設備 冷凍臺式離心機，低溫真空干燥儀，電泳儀，電泳槽。三、試劑 TE-飽和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE 緩沖液，無RNA 酶的雙菌水。四、操作步驟1、取一eppendorf 管加入提純
分子生物學常用實驗技術（八）
第五章重組質粒的連接、轉化及篩選第一節概述 質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的DNA 片段(＜10kb)且結構簡單,質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆,從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段, 然后體外使兩者相連接, 再用所得