使用合成核苷酸作探針實驗
實驗材料 核苷酸試劑、試劑盒 SSC焦磷酸鈉SDS儀器、耗材 培養箱水浴鍋實驗步驟 1. 制備雙份的轉印細菌菌落或噬斑的硝酸纖維素濾膜（處理和干烤過）。2. 在室溫下用3× SDS / 0.1%SDS溶液500 ml 洗膜3~5次。3. 然后在65℃洗膜至少1.5 h 以上直至過夜。 4. 在預雜交液中37℃預雜交1 h。 5. 在裝有20 ml 以上的SSC雜交液的可封口的雜交袋中可移入多達20張的濾膜。6. 在毎 個雜交袋中每毫升雜交液加入0.125 ng 至1.0 ng 的每種32P標記的寡核苷酸。7. 在以下給定的溫度條件下寡核苷酸雜交14~48 h。（1）14 堿基——室溫（2）17 堿基——37℃（3）20 堿基——42℃（4）23 堿基——48℃ 8. 從雜交袋中取出濾胰，用6×SSC / ......閱讀全文
使用合成核苷酸作探針實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 核苷酸 試劑、試劑盒 SSC 焦磷酸鈉 SDS
使用合成核苷酸作探針實驗
實驗材料 核苷酸試劑、試劑盒 SSC焦磷酸鈉SDS儀器、耗材 培養箱水浴鍋實驗步驟 1. ?制備雙份的轉印細菌菌落或噬斑的硝酸纖維素濾膜（處理和干烤過）。2. ?在室溫下用3× SDS / 0.1%SDS溶液500 ml 洗膜3~5次。3. ?然后在65℃洗膜至少1.5 h 以上直至過夜。?4. ?
使用合成核苷酸作探針實驗——在綠化四甲胺中（TMAC）雜交
實驗材料寡核苷酸試劑、試劑盒LBSDSEDTATMAC儀器、耗材水浴鍋離心機培養箱尼龍膜實驗步驟1. ?按“在氯化鈉/檸檬酸鈉中雜交”介紹的方法處理已影印細菌菌落的濾膜。2. ?按下列方法制備帶擴增噬斑的濾膜（1）從文庫中以漸減密度〔15 000~8 000噬斑 / 150 mm 平板）的方式將噬菌
使用合成核苷酸作探針實驗——在氯化鈉/檸檬酸鈉中雜交
基因探針（probe）又稱“寡核苷酸探針”，簡稱“探針”，就是一段與目的基因或DNA互補的特異核苷酸序列，它可以包括整個基因，也可以僅僅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之轉錄而來的RNA。實驗材料核苷酸試劑、試劑盒SSC焦磷酸鈉SDS儀器、耗材培養箱水浴鍋實驗步驟1. ?制備雙份的轉印
探針合成實驗
實驗材料基因試劑、試劑盒轉錄緩沖液DTTRNA酶抑制劑CTPATPGTPS-UTP乙酸銨乙酸銨乙醇儀器、耗材水浴鍋離心機培養箱烘箱實驗步驟1. ?在一個含SP6、T3或T7啟動子的載體中，插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質粒呈線性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以無菌水重溶沉
探針合成實驗
實驗材料 基因試劑、試劑盒 轉錄緩沖液DTTRNA酶抑制劑CTPATPGTPS-UTP乙酸銨乙酸銨乙醇儀器、耗材 水浴鍋離心機培養箱烘箱實驗步驟 1. ?在一個含SP6、T3或T7啟動子的載體中，插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質粒呈線性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以無菌
探針合成實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 基因 試劑、試劑盒
合成的寡核苷酸探針的優點
合成的寡核苷酸探針具有一些獨特的優點：一.由于鏈短，其序列復雜度低，分子量小，所以和等量靶位點完全雜交的時間比克隆探針短，如20nt的寡核苷酸探針在濃度為100ng/ml，靶序列為1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L時，達到最大程度的雜交只需10min，而用2kb的克
合成寡核苷酸探針的技術步驟
首先使支持物羥基化，并用光敏保護基團將其保護起來。每次選取擇適當的蔽光膜（mask）使需要聚合的部位透光，其它部們不透光。這樣，光通過蔽光膜照射到支持物上，受光部位的羥基解保護。因為合成所用的單體分子一端按傳統固相合成方法活化，另一端受光敏保護基的保護，所以發生偶聯的部位反應后仍舊帶有光敏保護基團。
合成的寡核苷酸探針的優點
合成的寡核苷酸探針具有一些獨特的優點：一.由于鏈短，其序列復雜度低，分子量小，所以和等量靶位點完全雜交的時間比克隆探針短，如20nt的寡核苷酸探針在濃度為100ng/ml，靶序列為1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L時，達到最大程度的雜交只需10min，而用2kb的克
合成的寡核苷酸探針的優點
合成的寡核苷酸探針具有一些獨特的優點：一.由于鏈短，其序列復雜度低，分子量小，所以和等量靶位點完全雜交的時間比克隆探針短，如20nt的寡核苷酸探針在濃度為100ng/ml，靶序列為1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L時，達到最大程度的雜交只需10min，而用2kb的克
生物素酰化探針的制備實驗——隨即寡核苷酸引物合成法
實驗材料DNA試劑、試劑盒dNTP生物素klenow酶TEEDTALiCl乙醇儀器、耗材離心機培養箱實驗步驟1. ?在1. 5 ml 離心管中加入500 ng~2 μg 模板DNA，加水至總體積為34 μl。?2. ?在沸水中變性DNA 5 min 置于冰浴5 min，稍加旋離。3. ?按順序加入下
用隨機寡核苷酸引物從mRNA合成cDNA探針
實驗方法原理 本方案以 poly(A) + RNA 作為模板，通過隨機引物反應合成 cDNA 探針，這類探針可用于 cDNA 文庫的差異篩選。實驗材料 反轉錄酶反轉錄酶緩沖液隨機脫氧核苷酸引物模板 mRNA試劑、試劑盒 乙酸銨DTTEDTA乙醇HClNaOH酚氯仿胰 RNA 酶抑制劑SDS Tris
用隨機寡核苷酸引物從mRNA合成cDNA探針
本方案以 poly(A)?+?RNA 作為模板，通過隨機引物反應合成 cDNA 探針，這類探針可用于 cDNA 文庫的差異篩選。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理本方案以 poly(A)?+?RNA 作為模板，通過隨機引物反應合成 cDNA 探針，這類探針可用于 cDNA
用隨機寡核苷酸引物從mRNA合成cDNA探針
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案以 poly(A) + RNA 作為模板，通過隨機引物反應合成 cDNA 探針，這類探針可用于 cDNA 文庫的差異篩選。 實驗材料
寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 寡核苷酸雜交液 寡核苷酸預雜交液 SSC 或 SSPE TEAC1 洗滌液 TMAC1或 TEACl TMAC1 洗滌液
寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗
試劑、試劑盒 寡核苷酸雜交液寡核苷酸預雜交液SSC 或 SSPETEAC1 洗滌液TMAC1或 TEAClTMAC1 洗滌液核酸和寡核苷酸放射性標記的寡核苷酸探針儀器、耗材 雜交裝置振蕩培養器實驗步驟 材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至適當濃度。寡核苷酸雜交液6XSSC(或 6XSSPE)0.05mol/
寡核苷酸探針在溶液中的雜交實驗
Jabobs等 （ 1988）介紹了在含季銨鹽緩沖液中雜交的方法與原理。下述為該法的簡單變通方案。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。試劑、試劑盒寡核苷酸雜交液寡核苷酸預雜交液SSC 或 SSPETEAC1 洗滌液TMAC1或 TEAClTMAC1 洗滌液核酸和寡核苷酸放射性標
用寡聚（dT）作引物合成放射性標記的扣除cDNA探針
實驗方法原理?本方案描述通過與 mRNA 驅動方雜交，繼之以羥基磷灰石層析純化單鏈放射性標記的 cDNA，制備扣除 cDNA 探針。實驗材料?反轉錄酶反轉錄酶緩沖液驅動方 mRNA模板 mRNA試劑、試劑盒?乙酸銨DTTEDTA乙醇HCl異丁醇NaOH酚氯仿胎盤 RNA 酶抑制劑SDSSDS EDT
用寡聚（dT）作引物合成放射性標記的扣除cDNA探針
本方案描述通過與 mRNA 驅動方雜交，繼之以羥基磷灰石層析純化單鏈放射性標記的 cDNA，制備扣除 cDNA 探針。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理本方案描述通過與 mRNA 驅動方雜交，繼之以羥基磷灰石層析純化單鏈放射性標記的 cDNA，制備扣除 cDNA 探針。實驗
寡核苷酸探針的簡介
基因探針，即核酸探針，是一段帶有檢測標記，且順序已知的，與目的基因互補的核酸序列(DNA或RNA)。基因探針通過分子雜交與目的基因結合，產生雜交信號，能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來。根據雜交原理，作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件：①應是單鏈，若為雙鏈，必須先行變性處理。②應帶有容
寡核苷酸探針技術介紹
利用寡核苷酸探針可檢測到靶基因上單個核苷酸的點突變。常用的寡核苷酸探針主要有兩種:單一已知序列的寡核苷酸探針和許多簡并性寡核苷酸探針組成的寡核苷酸探針庫。單一已知序列寡核苷酸探針能與它們的目的序列準確配對,可以準確地設計雜交條件,以保證探針只與目的序列雜交而不與序列相近的非完全配對序列雜交,對于一些
核苷酸的合成
核苷酸是核糖核酸及脫氧核糖核酸的基本組成單位，是體內合成核酸的前身物。核苷酸隨著核酸分布于生物體內各器官、組織、細胞核及細胞質中，并作為核酸的組成成分參與生物的遺傳、發育、生長等基本生命活動。生物體內還有相當數量以游離形式存在的核苷酸。三磷酸腺苷在細胞能量代謝中起著主要的作用。體內的能量釋放及吸收主
寡核苷酸探針的來源介紹
DNA探針根據其來源有3種：一種來自基因組中有關的基因本身，稱為基因組探針（genomic probe）；另一種是從相應的基因轉錄獲得了mRNA，再通過逆轉錄得到的探針，稱為cDNA探針（cDNA probe）。與基因組探針不同的是，cDNA探針不含有內含子序列。此外，還可在體外人工合成堿基數不
寡核苷酸探針的制備方法
寡核苷酸探針是人工合成的，與已知基因DNA互補的，長度可從十幾到幾十個核苷酸的片段。如僅知蛋白質的氨基酸順序量，也可以按氨基酸的密碼推導出核苷酸序列，并用化學方法合成。
寡核苷酸探針的用途介紹
寡核苷酸探針還有一個重要用途。在用于檢測單個堿基差異時尚可采用一種稱為寡核苷酸限制（oligonucleotiderestriction）的技術。該技術只有在突變點位于某一限制性內切酶識別位點時才有效。例如，鐮刀狀紅細胞貧血是因β珠蛋白基因的第6個寡碼子由GAG變成GTG，從而導致所編碼氨基酸由酪氨
核苷酸的合成代謝
嘌呤核苷酸主要由一些簡單的化合物合成而來，這些前身物有天門冬氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、CO2及一碳單位（甲酰基及次甲基，由四氫葉酸攜帶）等。它們通過11步酶促反應先合成次黃嘌呤核苷酸（肌苷酸）。隨后，肌苷酸又在不同部位氨基化而轉變生成腺苷酸及鳥苷酸。合成途徑的第一步是5-磷酸核糖在酶催化下，活化生成5
核苷酸的合成過程
核苷酸是核糖核酸及脫氧核糖核酸的基本組成單位，是體內合成核酸的前身物。核苷酸隨著核酸分布于生物體內各器官、組織、細胞核及細胞質中，并作為核酸的組成成分參與生物的遺傳、發育、生長等基本生命活動。生物體內還有相當數量以游離形式存在的核苷酸。三磷酸腺苷在細胞能量代謝中起著主要的作用。體內的能量釋放及吸收主
核苷酸的合成途徑
核苷酸是核糖核酸及脫氧核糖核酸的基本組成單位，是體內合成核酸的前身物。核苷酸隨著核酸分布于生物體內各器官、組織、細胞核及細胞質中，并作為核酸的組成成分參與生物的遺傳、發育、生長等基本生命活動。生物體內還有相當數量以游離形式存在的核苷酸。三磷酸腺苷在細胞能量代謝中起著主要的作用。體內的能量釋放及吸收主
關于寡核苷酸探針的標記介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統 、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。