什么是內參基因
這個概念一般是用在定量PCR中。定量PCR是要檢測某個基因的表達,降低或者提高,但是當你得出結果以后,你并不知道是它本身的表達降低/提高了,還是你操作過程中造成的誤差(比如提RNA時的損失),所以這個時候需要同時檢測另外的基因作為參照。這個基因就是內參基因,這類基因是生物體或者細胞中穩定表達的基因,表達量幾乎不變。常用的內參基因如β-actin,GAPDH,18s-rRNA等......閱讀全文
什么是內參基因
這個概念一般是用在定量PCR中。定量PCR是要檢測某個基因的表達,降低或者提高,但是當你得出結果以后,你并不知道是它本身的表達降低/提高了,還是你操作過程中造成的誤差(比如提RNA時的損失),所以這個時候需要同時檢測另外的基因作為參照。這個基因就是內參基因,這類基因是生物體或者細胞中穩定表達的基因,
目的基因的Ct值小于內參基因,這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致,說明你PCR的上樣量一致,樣本的質量也一致。如果出入很大,說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
目的基因的Ct值小于內參基因,這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致,說明你PCR的上樣量一致,樣本的質量也一致。如果出入很大,說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
關于PCR內參基因選擇策略
關于內參基因的選擇很多初級的實驗人員很少會去思考這個問題,因為擺在面前的只有兩種選擇,β-actin和GAPDH,甚至在很多人長期的觀念中對于內參的認知也僅僅停留在是一個表達量相對較高較穩定的看家基因,對于分子層面相對表達量的一個重要參照而已,至于為什么要選這兩種,還有沒有其他
關于PCR內參基因選擇策略
關于內參基因的選擇很多初級的實驗人員很少會去思考這個問題,因為擺在面前的只有兩種選擇,β-actin和GAPDH,甚至在很多人長期的觀念中對于內參的認知也僅僅停留在是一個表達量相對較高較穩定的看家基因,對于分子層面相對表達量的一個重要參照而已,至于為什么要選這兩種,還有沒有其他的內參,人們的回答往往
PCR實驗中內參基因的作用
1. 判斷樣品提取是否成功。假如你提取了總RNA然后再做逆轉錄得到cDNA,然后再去跑PCR發現沒有結果,是不是表示樣品中沒有你的目的基因呢?答案是:不一定。要根據使用同一模板跑出的內參基因的結果才可判斷。內參基因的CT在一個合理范圍(比如20左右)的前提下,才能說明樣品制備沒問題,在這個前提下,做
內參基因拷貝數正常范圍
基因組DNA拷貝數變化在許多人類疾病如腫瘤、遺傳性疾病的發生發展中起重要作用,也是這些疾病的細胞遺傳學表現。染色體顯帶已被運用了幾十年,具有其高度的可靠性并成為染色體分析的金標準,但其分辨率低(約為5~10Mb),需要中期細胞,操作費時。
內參基因與目的基因的Ct值相差很大
不同基因之間表達量差異很大,可達上千甚至上萬倍之差,所以CT值差10以內屬正常現象,但通常選用內參基因屬于表達量較高的持家基因,如果目標基因和內存基因表達量(CT值差)過大,用內參基因來衡量目標基因的表達量(絕對值)就不完全可靠,但至少可以說明目標基因表達非常低。
常用的內參基因及其使用范圍
內參即是內部參照,它們在各組織和細胞中的表達相對恒定,在檢測基因的表達水平變化時常用它來做參照物 你可以去生物幫那里了解這方面的信息,那兒技術文檔、視頻資源豐富,我很喜歡到那里找想要的東西,而且還有很多軟件可以下載,并且有軟件的教材。有時間可以去看看。 包括GAPDH 、β- actin(BETA-
熒光定量PCR實驗中的內參基因
通常它們在各組織和細胞中的表達相對恒定,在檢測基因的表達水平變化時常用它來做參照物。內參基因通常是持家基因(house-keeping gene)因為其表達水平受環境因素影響較小,而且在個體各個生長階段的幾乎全部組織中持續表達變化很小。常用的內參基因包括GAPDH、β-actin(BETA-acti
如何選一個好的內參基因
好的內參基因應該受環境影響變化較小,否則不能作為對照與處理的內參。常用內參有actin,ubiquitin,histone等等,一般物種都有常用內參,不建議在這方面發揮。
哪些內參基因在醫學研究中最常用?
在醫學研究中,以下內參基因較為常用:β-actin(β-肌動蛋白):在大多數細胞中廣泛表達,參與細胞骨架的構成。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶):參與糖酵解過程,在多種組織和細胞中穩定表達。18S rRNA:核糖體 RNA 的組成部分,在細胞中普遍存在。HPRT1(次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
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這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
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這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
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這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
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這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
real-time-PCR實驗為什么要使用內參基因
這個是根據定量PCR算法決定的,如果是相對定量,就需要內參,內參主要是使樣品均一化,你做實驗的時候,可能提取RNA時所用的樣品是相同的,反轉錄時所用的mRNA的量是相同的,做定量PCR時所加的cDNA量也是相同的。但是你的樣品是新長的部分,還是老的部分?反轉錄時是加相同的體積還是相同打質量,這些對結
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
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這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
realtime-PCR中內參基因的CT值
這個要看你在做PCR前的加樣量是否一致。如果加樣量是一致的,而內參做出來差別大(比如3-4個CT值)那說明你的實驗體系有嚴重的問題。理論上加入的DNA量一樣多,內參的CT值應該都一樣。如果你能肯定加樣量是一致的,那說明你的樣本要么降解了,要么就是你的實驗處理對內參的量產生了影響,必須換一個基因做內參
什么是內參,內參的作用是什么
內參就是取在一般細胞當中表達量較為穩定的基因,你的目的基因要與其進行比較。因為你每次的樣品不一定一樣,所以必須要有內參進行校正。要是內參沒有起峰,那這個數據基本沒用。
內參基因與目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之間表達量差異很大,可達上千甚至上萬倍之差,所以CT值差10以內屬正常現象,但通常選用內參基因屬于表達量較高的持家基因,如果目標基因和內存基因表達量(CT值差)過大,用內參基因來衡量目標基因的表達量(絕對值)就不完全可靠,但至少可以說明目標基因表達非常低。